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用实例说明高效液相色谱仪中的梯度洗脱

作者:佚名 来源: 日期:2019-9-18 10:33:11 人气:
  
高效液相色谱仪中的梯度洗脱就是在不同实验阶段采用不同的流动相溶剂比例,以达到较高的洗脱效率。在分阶段洗脱的时候使用的溶剂一般为两种,或者不同浓度的同种试剂,通过配比可以得到更多种类的流动相。现在就用实例来说明梯度洗脱的过程。
 
茶叶是人们日常生活中常见的饮品,其中茶多酚成分对人体有益,不过不同品种的茶其茶多酚的含量是不同的,加工工艺也有可能会对该成分造成损失。在检验茶多酚成分的实验中就会用到高效液相色谱仪,用到的流动相是甲醇和三氟乙酸,两种溶剂的极性存在差别,而它们都和茶多酚一样属于有机溶剂。根据相似相溶的原理可以使用这两种溶剂将待测组分洗脱下来。在实验开始二十分钟内,先将两种溶剂的比例调为一比三,即先将三氟乙酸的阀门开大,而甲醇的阀门调小。然后再接下来的五分钟内,将二者的比例调节为二比三,之后是九比一,就是提高甲醇试剂的流速。然后恢复初始状态。
 
实验过程中,不仅茶多酚会被分阶段洗脱下来,而一些其它有机物也会随之被洗脱下来,整个实验不仅能检测一类物质,还能将其它具有相似成分的物质一同检测出来。选择的光源波长不变,而混合后的流动相流速也保持稳定,改变的只是液相高压泵的阀门大小。保持柱温在35℃,既不会破坏茶多酚成分,也不会对色谱柱的稳定性造成影响。根据色谱图中峰值大小就能计算出样品中茶多酚成分的含量。随着甲醇试剂比例的改变,色谱图的形状会发生变化,在各阶段中均找到出现峰值的图形,将其综合起来就能全面计算待测组分含量。
 
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